Metode voor het meten van maïsaflatoxine
Aflatoxine, afgekort als AFT in het Engels, is een verbinding die bestaat uit een difuranylring en cumarine (oxanaphthoquinone).,met een moleculair gewicht van 312-346 en een smeltpunt van 200-300 °C. Het heeft stabiele en hoogtemperatuurbestendige eigenschappen en kan fluorescentie produceren onder lange golf ultraviolet licht.Het is onderverdeeld in B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM en giftige alcoholen volgens verschillende fluorescentie kleuren, RF waarden en structuren.
AFT is onoplosbaar in water, ethaan, ether en petroleumether, maar gemakkelijk oplosbaar in organische oplosmiddelen zoals methanol, ethanol, chloroform, acetonitril en dimethylformamide.AFT kan licht ontbinden in zure oplosmiddelen met een pH van 1-3, snel ontbinden en afbreken in oplossingen met een pH van 9-10, snel ontbinden bij blootstelling aan alkalische stoffen en ontbinden in bijna niet-toxische zouten in alkalische oplossingen met een pH van 9-10.Het kan worden verminderd onder zure omstandigheden.
Doel van het experiment
Aflatoxine is een zeer giftige kankerverwekkende stof die door schimmels wordt geproduceerd.veel voorkomende leverfunctiestoornissen, zoals koortsLangdurige blootstelling aan lage doses (20 microgram per kg lichaamsgewicht) kan het risico op leverkanker, maagkanker en andere ziekten aanzienlijk verhogen.Aangezien het veel voorkomt in gewassen en voedsel en grote schade aan mens en dier veroorzaakt, is het vaststellen van snelle en nauwkeurige detectiemethoden van groot belang voor de veiligheid van levensmiddelen en de volksgezondheid.
Het doel van dit experiment is het gebruik van het beginsel van de vaste fase enzymgebonden immunosorptieve test (ELISA), namelijk enzymgebonden immunosorptieve test (ELISA),om het gehalte aan aflatoxine B1 in monsters te beperken en te kwantificeren, die een wetenschappelijke basis biedt voor de beoordeling van het risico op verontreiniging van levensmiddelen.
Experimentele apparatuur
1 ST-2000A mycotoxine analysator
2 Maïs, homogeniserende stof, stikstofdrogingsinrichting, oscillator, centrifuge, gegradueerde pipet, balans (gevoeligheid 0,01 g), micropipet, methanol, n-hexaan, chloroform of dichloormethaanreagentia
Proefprocedure
1 Controleer of de apparatuur die in het experiment wordt gebruikt schoon, droog en vrij is van verontreiniging
2 Meng methanol en gedeïoniseerd water in een verhouding van 7: 3 om de oplossing voor het extraheren van het monster voor te bereiden
3 Neem 2 g maïsmonster en plaats het in een 50 ml centrifugebuis. Voeg 5 ml monsterextractieoplossing toe en schud het gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur van 4000 rpm gedurende 10 minuten.Neem 0.5 ml supernatant toevoegen en 0,5 ml gedeïoniseerd water.
4 Verwijder de benodigde reagentia uit de koelruimte van 4 °C, laat ze 30 minuten balanceren bij kamertemperatuur en schudt goed.en verdun de geconcentreerde wasoplossing 20 keer met gedeïoniseerd water om de werkende wasoplossing te maken.
5 De overeenkomstige microporen van het monster en de standaard in volgorde nummeren, voor elk monster en standaard 2 parallelle putten maken en de posities van de standaardputten en de monsterputten registreren.50 μl/put standaard- of monster wordt toegevoegd aan de respectieve microporen, voeg dan 50 μl/put enzymmarker toe en voeg vervolgens 50 μl/put werkoplossing van antilichamen toe.Reageren bij 25 °C gedurende 30 minuten.
Verwijder de dekselfolie, schud de vloeistof in het gat af en was het 5 keer grondig met 250 μl werkmiddel per gat, met een tussenpoos van 30 seconden tussen elk wassen.Gebruik absorberend papier om te drogen
7 Voeg substraatoplossing A (50 μl) toe aan elke put, gevolgd door substraatoplossing B (50 μl). Schud gedurende 5 seconden en meng goed. Kleur bij 25 °C in het donker gedurende 15 minuten.
Voeg 50 μl eindoplossing toe aan elke put, schud voorzichtig en meng goed om de reactie te beëindigen.
9 De absorptiewaarde van elke put wordt gemeten bij 450 nm met behulp van een aflatoxine-analysator (dubbele golflengte 450/630 nm wordt aanbevolen).De meting moet binnen 10 minuten na het einde van de reactie worden voltooid.
10 Het apparaat voltooit de meting en geeft automatisch het resultaat
Experimentele resultaten
Na het testen is het aflatoxinegehalte van het monster ongeveer 0,19ug/kg, wat voldoet aan GB 2761-2017 "National Food Safety Standard for Fungal Toxins Limits in Food".