ELISA-stabiliteit ≤ ± 0,003Abs Mycotoxine Tester ST-2000A golflengtebereik 400-900nm

ST-2000A Mycotoxinetester

De ST-2000A mycotoxine-analysator is een noodzakelijk analytisch instrument voor aflatoxine- en enzymgekoppelde immunosorbenstests. Het principe van de solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), namelijk de enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), bestaat uit dit instrument en de B1-kit, die kan worden gebruikt om het gehalte aan aflatoxine B1 en andere mycotoxinen in monsters te bepalen. op een beperkte en kwantitatieve manier (indien uitgerust met andere kits kunnen andere toxines worden gedetecteerd). Het wordt veel gebruikt bij de detectie van aflatoxine B1 en andere mycotoxinen in voedsel, veevoer, olie, zuivelproducten, medicijnen, dranken, wijn en andere producten.

Prestatiekenmerken:

1. Weergavebediening: LCD-kleurenscherm, videofoonverdeelbord, weergave van volledige bordinformatie, bediening via aanraakscherm

2. Trilplaatfunctie: Niveau 3 trilplaatsnelheid, tijd 0-255 seconden instelbaar

3. Werkstation: professionele enzymmarkersoftware, die 500 programmagroepen, 100.000 monsterresultaten kan opslaan en rijke berekeningsmodi biedt, zoals absorptie, lineaire vergelijking, logaritmische vergelijking, kwadratische vergelijking, kubieke vergelijking, absorptiepercentage-concentratie logaritmische vergelijking, spline functie, remmingssnelheid, enz

Technische parameters:

Lichtbron: DC12V 22W geïmporteerde halogeenlamp

Golflengtebereik: 400-900 nm

Filter: 405, 450, 492, 630 nm standaard, andere golflengten optioneel

Leesbereik: 0-4.000 Abs

Resolutie: 0,001 Abs

Indicatiefout: ≤ ± 0,01 Abs

Stabiliteit: ≤ ± 0,003 Abs

Herhaalbaarheid: ≤ 0,3%

Grootte: 400 mm x 260 mm x 200 mm

1 Principe en toepassing

Deze kit maakt gebruik van de indirecte competitieve ELISA-methode om aflatoxine B1 (AFB1) te detecteren in granen, voer en andere monsters. De kit bestaat uit een met een enzym gelabelde plaat die vooraf is gecoat met koppelingsantigeen, mierikswortel-enzymmarker, antilichaam, standaard en andere bijpassende reagentia. Voeg tijdens de test de standaard- of monsteroplossing toe, het aflatoxine B1 in het monster en de enzymplaat worden vooraf bedekt met het conjugaatantigeen om te strijden om het anti-aflatoxine B1-antilichaam. Gebruik na het toevoegen van de enzymmarker het TMB-substraat om de kleur te ontwikkelen. De absorptiewaarde van het monster is negatief gecorreleerd met het gehalte aan aflatoxine B1 in het monster. De resterende hoeveelheid aflatoxine B1 in het monster kan worden verkregen door vergelijking met de standaardcurve.

2 Technische indicatoren

2.1 Kitgevoeligheid: 0,03 ppb (ng/ml)

2.2 Reactiemodus: 25 ℃, 30min ~ 15min

2.3 Onderste detectiegrens:

Granen................................................. ..... 0,15 ppb

Formulevoeding.......................................... 0,3 ppb

Eetbare olie, pinda.................................. 0,6 ppb

Sojasaus, tarwe en ander voer.............................. 0,3 ppb

Bier............................................ 0,3 ppb

Wijn, sojasaus, azijn............................. 0,15 ppb

2.4 Kruisreactiesnelheid:

Aflatoxine B1 100%

2.5 Herstelpercentage monster:

Granen en kunstvoeding.............................. 85% ± 15%

Pinda.................................. 82 ± 15%

Eetbare olie.......................................... 85 ± 15%

Sojasaus, tarwe en ander voer.............................. 83 ± 15%

Bier................................... 84 ± 15%

Wijn, sojasaus, azijn............... 87 ± 15%

3 Kit-samenstelling

Enzymmarkeringsplaat.......................................... 96 gaten

Standaardoplossing (zwart deksel): elk 1 ml

0ppb,0,03ppb,0,06ppb,0,12ppb,0,24ppb,0,48ppb

Hoge standaardoplossing: 100ppb................................ 1ml

Enzymmarker (rode dop)............................ 5,5 ml

Antilichaamwerkoplossing (blauwe dop).............................. 5,5 ml

Substraatoplossing A (witte dop).............................. 6ml

Substraatvloeistof B (zwart deksel)............................ 6ml

Beëindigingsoplossing (gele dop)............................ 6 ml

20X geconcentreerde wasoplossing (witte deksel).............. 40 ml

Gebruiksaanwijzing.......1kopie

4 Benodigde apparatuur en reagentia

4.1 Apparaat: aflatoxinetester, printer, homogenisator, stikstofdroogapparaat, oscillator, centrifuge, maatpipet, balans (gevoeligheid 0,01 g)

4.2 Micropipet: eenkanaals 20 µl-200 µl, 100 µl-1000 µl, meerkanaals 300 µl

4.3 Reagens: methanol, n-hexaan, trichloormethaan of dichloormethaan

5 Monstervoorbehandeling

5.1 Instructies vóór monsterverwerking:

Het experimentele apparaat moet schoon zijn en een wegwerpbare zuigkop gebruiken om besmetting en interferentie met de experimentele resultaten te voorkomen.

5.2 Bereiding van de oplossing:

Oplossing 1: monsterextract

70% methanol, dwz V methanol: V gedeïoniseerd water = 7:3.

5.3 Stappen voor monstervoorbehandeling:

5.3.1 Werkwijze graanverwerking

1) Weeg 2 g vermalen monster in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 5 ml monsterextractieoplossing toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Neem 0,5 ml supernatant, voeg 0,5 ml gedeïoniseerd water toe en meng goed;

3) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 5 Onderste detectielimiet: 0,15 ppb

5.3.2 Verwerkingsmethoden voor monsters met een sterke waterabsorptie, zoals maïsschillen en tarwezemelen

1) Weeg 2 g vermalen monster in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 20 ml monsterextractieoplossing toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Neem 0,5 ml supernatant, voeg 0,5 ml gedeïoniseerd water toe en meng goed; (Voor het monster met een extreem hoog toxinegehalte kan het worden verdund met 35% methanol en vervolgens worden getest. Neem bijvoorbeeld 0,1 ml van de gemengde oplossing in 2) en 0,9 ml 35% methanol om te mengen. De uiteindelijke monsterverdunningsverhouding is 200 en de detectielimiet is 6 ppb.)

3) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Monsterverdunningsverhouding: 20 Onderste detectielimiet: 0,6 ppb

Opmerking: Omdat de verdeling van het toxine in het monster ongelijkmatig is, is het noodzakelijk om monsters van meerdere punten te nemen en deze volledig te mengen voordat u 2 g voor de test neemt.

5.3.3 Verwerkingswijze van formulevoeders

1) Weeg 2 g vermalen monster in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 10 ml monsterextractieoplossing toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Neem 0,5 ml supernatant, voeg 0,5 ml gedeïoniseerd water toe en meng goed;

3) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 10 Onderste detectielimiet: 0,3 ppb

5.3.4 Voerbehandelingsmethoden voor eetbare olie, pinda's en vetrijke producten

1) Weeg 2 g vermalen monster af in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 8 ml n-hexaan en 10 ml monsterextractieoplossing toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Verwijder de bovenste vloeistof, neem 0,5 ml van de onderste vloeistof en voeg 0,5 ml gedeïoniseerd water toe, meng goed, neem dan 0,5 ml van de gemengde vloeistof en voeg 0,5 ml 35% methanol toe, schud gedurende 30 seconden;

3) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 20 Onderste detectielimiet: 0,6 ppb

5.3.5 Voedsel of specerijen zoals sauzen, tarwe, koekjes, gebak en voerverwerkingsmethoden zoals voerconcentraat

1) Weeg 2 g vermalen monster in een centrifugebuis van 50 ml, voeg 10 ml monsterextractieoplossing toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Neem 2 ml supernatant, voeg 4 ml trichloormethaan (of dichloormethaan) toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

3) Breng de bovenste vloeistof over naar een andere container, laat de onderste vloeistof stand-by staan, voeg nog eens 4 ml chloroform (of dichloormethaan) toe aan de bovenste vloeistof, schud en meng gedurende 5 minuten, en de kamertemperatuur is 4000 rpm/scheidingscentrum voor 10 minuten;

4) Verwijder de bovenste vloeistof, combineer de onderste vloeistof tweemaal en meng volledig;

5) Neem 2 ml van de gecombineerde onderste vloeistof en blaas deze droog onder 50-60 ℃ stikstof;

6) Voeg 0,5 ml monsterextract toe om de gedroogde substantie volledig op te lossen en voeg vervolgens 0,5 ml gedeïoniseerd water toe om te mengen;

7) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 10 Onderste detectielimiet: 0,3 ppb

5.3.6 Bierverwerkingsmethode

1) Roer het bier volledig door (verwijder CO2), neem 2 ml biermonster, voeg 1 ml gedestilleerd water toe, voeg 7 ml methanol toe en schud gedurende 5 minuten;

2) Neem 0,5 ml gemengde monsteroplossing en voeg 0,5 ml gedeïoniseerd water toe om goed te mengen;

3) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 10 Onderste detectielimiet: 0,3 ppb

5.3.7 Behandelingswijze van wijn, sojasaus en azijn

1) Neem 2 ml monster, voeg 2 ml gedestilleerd water toe, voeg 10 ml trichloormethaan (of dichloormethaan) toe, schud gedurende 5 minuten, 4000 rpm bij kamertemperatuur/10 minuten scheidingscentrum;

2) Neem 1 ml van de onderste vloeistof en blaas deze droog onder 50-60 ℃ stikstof;

3) Voeg 0,5 ml monsterextract toe om de gedroogde substantie volledig op te lossen, voeg vervolgens 0,5 ml gedeïoniseerd water toe en meng goed;

5) Neem een ​​analyse van 50 μl.

Verdunningsverhouding monster: 5 Onderste detectielimiet: 0,15 ppb

6 stappen van ELISA

Haal het benodigde reagens uit de koude opslagomgeving van 4 ℃ en plaats het gedurende meer dan 30 minuten bij kamertemperatuur. Er kunnen kristallen zijn die op kamertemperatuur moeten worden gebracht om volledig op te lossen wanneer de wasoplossing koud wordt bewaard. Elk vloeibaar reagens moet vóór gebruik worden geschud. Haal het vereiste aantal microporeuze platen en frames eruit, plaats de ongebruikte microporeuze platen in zelfsluitende zakken en bewaar ze bij 2-8 ℃.

Vóór het experiment wordt 20 x de geconcentreerde wasoplossing 20 keer verdund tot werkende wasoplossing.

6.1 Nummering: nummer de overeenkomstige putjes van het monster en de standaard in volgorde, maak twee parallelle gaten voor elk monster en elke standaard, en noteer de positie van het standaardgat en het monstergat.

6.2 Reactie voor het toevoegen van monsters: voeg 50 µl/putje standaard of monster toe aan de respectievelijke putjes, voeg vervolgens 50 µl/putje enzymmarker toe en voeg vervolgens 50 µl/putje antilichaamwerkoplossing toe, sluit de plaat af met een afdekplaat membraan, schud zachtjes gedurende 5 seconden, meng en laat gedurende 30 minuten reageren bij 25 ℃.

6.3 Wassen: Verwijder voorzichtig het afdekplaatmembraan, droog de vloeistof in het gat, was het gat volledig met een werkende wasoplossing 250 µl/gat gedurende 5 keer, met een interval van 30 seconden, en dep het droog met absorberend papier (het luchtbellen die na het kloppen niet zijn verwijderd, kunnen worden doorboord met een schone pistoolkop).

6.4 Kleurontwikkeling: voeg 50 µl substraatoplossing A en 50 µl substraatoplossing B toe aan elk gaatje, schud zachtjes gedurende 5 seconden en meng goed, en ontwikkel kleur in het donker bij 25 ℃ gedurende 15 minuten.

6.5 Beëindiging: voeg 50 µl beëindigingsoplossing toe aan elk gat, schud voorzichtig en meng goed om de reactie te beëindigen.

6.6 Meting van de absorptiewaarde: gebruik de aflatoxinetester om de absorptiewaarde van elk gat te meten bij 450 nm (dubbele golflengte 450/630 nm wordt aanbevolen). De bepaling moet binnen 10 minuten nadat de reactie is beëindigd, worden voltooid

6.7 De automatische aflatoxinetester ST-2000A voltooit automatisch de bepaling en produceert automatisch de resultaten.